人多聚免疫球蛋白受体pIgR介导EMT的作用研究及机制初探
多聚免疫球蛋白受体(pIgR)属于I型跨膜糖蛋白，可以与多聚免疫球蛋白A和多聚免疫球蛋白M特异性结合，通过穿胞转运，将它们从上皮细胞基底侧膜转运到顶膜，并最终分泌到外分泌液中去。MDCK是狗的肾上腺皮质细胞，该细胞株因适合作为上皮生物学模型而被广泛应用。在组织培养中，MDCK细胞能够形成上皮致密单层。本课题组前期实验利用真核转染技术，成功构建了人pIgR稳定高表达的MDCK细胞株(命名为MDCK-pIgR，阴性对照组细胞命名为MDCK-mock)，在研究pIgR的极性转运时意外发现，MDCK-pIgR细胞株的增殖速加快，表型由柱状变为成肌纤维细胞样，并且，与MDCK-mock组细胞相比，这些细胞的运动性增强。进一步的表明pIgR的表达也许能够促进EMT的发生。
本论文采用RNA干扰技术，研究pIgR介导EMT的作用。论文分为三部分内容：
第一部分：pIgR低表达细胞株的建立
设计并合成三种RNA干扰质粒，稳定转染MDCK-pIgR细胞，采用RT-PCR、Western-Blotting和免疫荧光化学技术检测干扰效率。结果显示，RNA干扰效果明显，可以用于后续的实验。
第二部分：pIgR介导MDCK细胞EMT的作用研究
观察干扰组细胞与阴性对照组细胞形态变化，检测增殖相关指标，观察RNA干扰前后迁移、侵袭、粘附等细胞行为和软琼脂生长能力是否改变。结果显示，pIgR使MDCK细胞的形态发生显著变化，细胞的迁移、侵袭能力增强，而粘附力减弱，在软琼脂上的生长能力增强。以上结果说明，pIgR介导了MDCK细胞EMT的发生。
第三部分：pIgR介导EMT的可能分子机制初探
在MDCK细胞模型中，pIgR的穿胞转运机制被广泛研究。在与配体结合或二聚化后，pIgR能够发生磷酸化。为了找到MDCK-pIgR细胞发生EMT的机制，我们采用RT-PCR、Western-Blotting等技术检测了ERK、Snail、角蛋白、F-actin，并采用IP方法探讨pIgR是否能够发生磷酸化调节细胞信号。推测pIgR介导EMT的可能分子机制为：pIgR的高表达促进ERK1/2磷酸化，上调Snail，下调E-钙粘素的表达，粘附连接破坏，细胞骨架重新排列，从而导致EMT的发生；而上述过程是由pIgR Tyr的磷酸化引起的。
本论文的研究发现了pIgR在调节EMT中的作用，拓展了pIgR的研究领域。为pIgR的促肿瘤生成作用奠定了基础。提示pIgR是肿瘤治疗中的潜在靶点。基于进一步的评价，在特殊肿瘤组织中抑制pIgR的表达可能会成为阻断肿瘤转移的有效手段。
多聚免疫球蛋白受体;跨膜糖蛋白;RNA干扰;介导EMT;穿胞转运;肿瘤治疗;pIgR
中国海洋大学
硕士
生药学
辛现良
2008
中文
Q513.2
68
2008-12-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）