单环刺螠纤溶酶UFEⅠ的分离纯化和性质研究
血栓性疾病是严重危害人类健康的常见多发病，心脑血管疾病中有很大比例本质为血栓病，它主要危害心、脑、肺等的血管系统，造成成年人死亡或残疾。在我国，每年有超过260万人死于心脑血管疾病，每年需要进行溶栓治疗的病人超过300万人，并且，这类疾病的发病率曾逐年上升趋势。
纤溶疗法是治疗血栓性疾病的主要手段之一，迄今溶栓药物已发展了三代，但距理想的溶栓药物尚有差距。寻找和开发新型溶栓剂仍是心脑血管疾病治疗的重要内容。鉴于海洋生物活性物质具有独特的优点，海洋生物日益成为新药开发的珍贵资源。本实验室经多年研究，从海洋无脊椎动物单环刺螠中寻找和分离了一种新型纤溶酶。现将主要研究结果分述如下：
单环刺螠纤溶酶在单环刺螠体腔液及内脏等组织内含量丰富，经优化工艺可提取多种酶活力组分，很可能是一组同工酶。我们试用两套工艺均能制得单环刺螠纤溶酶UFE Ⅰ，达电泳纯，经过提取分离纯化工艺的酶纯化倍数可达11－12倍，产品酶得率可达27.0－30.0％。
单环刺螠纤溶酶经Native-PAGE电泳分析，该酶纯度已经达到99％；经SDS-PAGE和飞行质谱测定其分子量约为23，800Da；糖含量测定表明，该酶不是一种糖蛋白。
单环刺螠纤溶酶，在45℃以下时酶活力稳定，6h内酶的活性基本保持不变；在10种不同pH(3、4、5、6、7、8、9、10、11)的缓冲液中于室温下放置24h，酶活无明显改变。
单环刺螠纤溶酶的最适反应温度为45℃，最适pH约为6.5。
Ag+离子对单环刺螠纤溶酶有抑制作用，Mn2+和Mg2+离子对酶有活化作用。其他金属离子。
以酪蛋白为底物，根据双倒数作图法(Lineweaver-Burk plot)求出的酶反应的动力学常数为：Km=3.48×10-3mol·L-1， Vmax=1.20×10-2mol·L-1·min-1。
单环刺螠纤溶酶对纤维蛋白具有很高的亲和性，不仅可以降解纤维蛋白，还具有较高的激酶活性，这使得该酶能够激活纤溶酶原并使之转化为纤溶酶，从而间接地溶解纤维蛋白。
体外抗凝、溶栓实验结果表明：与蚓激酶相比，单环刺螠纤溶酶具有更好的抗凝作用和溶栓效果，而且对血红细胞损伤较小。
综上所述，由于单环刺螠纤溶酶分子量小、酶活性稳定、溶栓活性强、对血红细胞损伤小等优点，做为溶栓剂具有潜在的应用开发价值。
单环刺螠;纤溶酶;分离纯化;血栓性疾病;纤溶疗法
中国海洋大学
硕士
海洋生物学
刘万顺
2008
中文
Q55;Q178.53
66
2008-12-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）