异源冷冻精子诱导大菱鲆和大西洋牙鲆雌核发育的研究

苏鹏志

中国海洋大学

摘要：

本文探索了异源冷冻精子诱导大菱鲆(Scophthalmus maximus)和大西洋牙鲆(Paralichthys dentatus)雌核发育的条件，建立了采用冷冻保存的鲈鱼(Lateolabrax japonicus)精液诱导这几种海水鱼类雌核发育的方法，并采用不同的方法对雌核发育后代做了分析鉴定。为大规模培育这几种鱼的全雌菌种奠定了基础。研究结果如下：
1.鲈鱼精子，不管是否经过紫外线照射处理，都可以刺激大菱鲆卵开始胚胎发育过程，并且两组卵的胚胎发育过程完全相同。卵在(13±0.2)℃海水中大约95小时至出膜前期。由于没有经过染色体加倍化处理，两组胚胎均发育畸形，呈现出典型的单倍体综合症。实验组未发现有正常形态的仔鱼。从而确定，鲈鱼精子与大菱鲆卵子杂交所得后代即为大菱鲆的单倍体。通过对雌核发育冷休克起始时间，冷休克温度和冷休克持续时间的筛选和优化，确定了利用鲈鱼未灭活精子诱导大菱鲆卵雌核发育的最佳条件是：在13℃下授精6min后，用(-1～0)℃的海水对卵进行持续25min的冷休克处理。对孵出的仔鱼养殖5到7天，单倍体苗会全部死掉，剩下的正常形态苗种即为大菱鲆雌核二倍体。比较正常二倍体、单倍体和人工诱导雌核发育二倍体胚胎的发育速度和形态学特征，结果表明，不同胚胎发育速度有明显区别，表现为：正常二倍体和单倍体>人工诱导雌核发育二倍体。形态学上单倍体胚胎表现为头小，尾短，活动能力弱，破膜困难，人工诱导雌核发育二倍体胚胎则同正常二倍体胚胎同期特征一致。
2.使用鲈鱼精子经紫外照射灭活后与大西洋牙鲆卵受精，按照受精后5min开始对卵进行3℃、30min的冷休克处理，获得了大批的仔鱼。对后代进行染色体技术鉴定，结果表明，未经冷休克处理的胚胎染色体数目为n=24，是大西洋牙鲆单倍体；而经冷休克诱导处理所得到的鱼苗染色体数为2n=48，即为大西洋牙鲆雌核发育鱼苗。

关键词：异源冷冻精子;大菱鲆;大西洋牙鲆;雌核发育

授予单位：中国海洋大学

授予学位：硕士

学科专业：细胞生物学

导师姓名：陈松林

学位年度：2008

语种：中文

分类号：S917.4;Q952

页数：53

在线出版日期：2008-12-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）