斑马鱼CD36可与细菌及病原相关分子模式结合并受脂肪酸诱导表达
清道夫受体(SRs)是一种细胞表面的跨膜糖蛋白,属于受体超基因家族,在哺乳动物病原体识别和防御中起到重要作用。近期研究表明SRs同系物在斑点叉尾鮰、虹鳟、大西洋鳕鱼等硬骨鱼中也存在,但对其特性和功能的认识依然有限。而且同哺乳动物相比,鱼类在免疫应答中的作用机制并不完全相同。所以有必要对鱼类SRs进行深入研究,以加深对其在鱼类病原体识别和清除中所扮演的角色和在生物进化中功能的演变的认识。为此,我们以斑马鱼中一种B类清道夫受体CD36为对象,探索了其在先天免疫应答中的作用。 首先我们以RAW264.7细胞系为对象,将斑马鱼CD36基因ORF与pcDNA3.1/V5-HisA构建为pcDNA-CD36真核载体,并将其转染进RAW264.7细胞,然后通过LPS和LTA进行刺激,实时定量PCR结果显示LPS和LTA两种分子均能诱导CD36 mRNA的表达量升高,表明其在细胞免疫防御中发挥作用。为进一步探索斑马鱼CD36在天然免疫中的作用,我们又以前期构建的pET-28a/CD36重组质粒为基础,对rzCD36进行了大量诱导表达和纯化,并通过Western Blot和质谱分析进行了鉴定,确定表达的重组蛋白即为斑马鱼CD36的胞外功能域。我们通过Western Blot和FITC荧光标记两种方法研究了重组蛋白rzCD36与革兰氏阳性菌S.aureus和革兰氏阴性菌E.coli的结合情况,实验结果表明rzCD36与这两种细菌均能够发生结合。为深入研究斑马鱼CD36对外源性病原分子的识别作用,我们通过ELISA技术研究斑马鱼重组蛋白rzCD36与革兰氏阳性细菌胞壁成分磷壁酸(LTA)、革兰氏阴性细菌壁成分脂多糖(LPS)的结合情况,结果表明rzCD36与这两种成分均有较强的结合能力。实验结果证明斑马鱼CD36能够结合细菌及LPS和LTA,暗示SRs在鱼类中也扮演着对细菌发挥识别和清除作用的角色。 此外,我们在细胞系体外实验中发现长链脂肪酸LA能够诱导斑马鱼CD36 mRNA上调表达,为进一步探索CD36在斑马鱼脂肪酸代谢和免疫调节之间是否起到桥梁作用奠定了基础。
CD36基因;清道夫受体;免疫应答;分子模式;脂肪酸诱导
中国海洋大学
硕士
生物工程
刘振辉
2014
中文
Q547;Q513.2;Q959.468
65
2015-04-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）