对虾白斑综合症病毒LAMP及变性高效液相色谱检测方法的建立与应用

赵巍

中国海洋大学

摘要：

据对虾白斑综合症病毒（White Spot Syndrome Virus，WSSV）的基因保守序列，利用引物设计软件Primer Explorer V3，设计了六条引物，建立了一种对虾白斑综合症病毒的环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）检测方法，并对LAMP反应时间、温度等反应参数进行了优化。该检测方法特异性好，与传染性皮下和造血器官坏死病毒、斑节对虾杆状病毒、肝胰腺细小病毒、对虾杆状病毒以及对虾基因组DNA无交叉反应；检测灵敏度约为10-4ng/μl，比常规PCR检测方法灵敏度高，与荧光定量PCR检测方法灵敏度相当。该检测方法耗时短，约1个小时即可完成检测。用建立的LAMP方法对46尾对虾样品进行了临床检测，结果与定量PCR方法检测结果一致。WSSV的环介导等温扩增检测方法，准确、特异、灵敏、成本低，适用于WSSV的早期及现场诊断。　　据对虾白斑综合症病毒（White Spot Syndrome Virus，WSSV）的基因保守序列，使用Primer Explorer V3软件设计了两条引物，利用PCR的扩增产物，结合变性高效液相色谱技术(denaturing high performance liquid chromatography, DHPLC)，建立了一种对虾白斑综合症病毒的DHPLC快速检测方法。该检测方法特异性好，与对虾杆状病毒、传染性皮下和造血器官坏死病毒、肝胰腺细小病毒、斑节对虾杆状病毒以及对虾基因组DNA无交叉反应；检测灵敏度较高，约为10-5ng/μl，高于常规PCR及荧光定量PCR检测方法的灵敏度。用建立的DHPLC方法对100尾对虾样品进行了临床检测，结果与荧光定量PCR方法检测结果一致。WSSV的DHPLC检测方法，特异性强、灵敏度高，是对WSSV进行有效检测的一种新方法。

关键词：对虾白斑综合症病毒;变性高效液相色谱技术;基因序列;传染机制;灵敏度

授予单位：中国海洋大学

授予学位：硕士

学科专业：渔业

导师姓名：潘鲁青

学位年度：2013

语种：中文

分类号：S945.46;O657.72

页数：37

在线出版日期：2013-09-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）