大叶藻形态学与细胞学研究
大叶藻是海洋高等种子植物，具有完整的根、茎、叶系统分化，属于单子叶植物纲（Monocotyledoneae）眼子菜科（Potamo-getonaceae）大叶藻属（Zostera）。海草及大叶藻形成的海草场在近海海洋生态系统中扮演着许多重要角色，对维护海洋生态系统的健康具有重要作用和意义，同时还可作为饲料和肥料等，因此其还具有一定的经济价值。近年来，对大叶藻属植物各方面的深入研究也逐渐成为研究的热点之一。本文以大叶藻为实验材料，通过徒手切片和石蜡切片的方法对大叶藻叶片和种子胚的形态学结构进行了观察研究，为大叶藻组织培养和无性繁殖提供了依据；试验了几种常用的消毒剂分别对大叶藻种子和幼苗进行无菌处理，分别得到对种子和幼苗的最佳消毒方法；利用无菌技术培养大叶藻无菌苗，得到制备原生质体的最佳实验条件，并对大叶藻原生质体培养条件进行了探索实验。本研究所用方法和取得的成果如下： 1、研究了固定方法、脱水及浸蜡时间、染色方式对大叶藻胚石蜡切片制作效果的影响。结果表明，采用标准固定液（FAA）固定48h以上，脱水每级梯度时间2h，分3次浸蜡（每次30min），苏木精伊红染色，可制作出染色清晰、组织结构完整的大叶藻胚切片。 2、为探寻大叶藻组织培养中外植体的最佳消毒方法，采用75％乙醇、1.5%碘化钾、4%次氯酸钠和10%双氧水这4种消毒剂以及不同的处理时间组合，对大叶藻种子和幼苗进行消毒试验。试验结果，最有效的外植体消毒方法为：对大叶藻幼苗，先用无菌水冲洗3～4次，再以75%乙醇处理20 s，然后再用无菌水冲洗3～4次，可以达到较好的消毒效果。对大叶藻种子，先以75%乙醇处理10 min，再以1.5%碘化钾处理10 min，然后用无菌海水冲洗3～4次，这样消毒效果最佳，且不影响种子的发芽率。 3、将上述消毒处理好的种子分别接种到盐度为5‰和30‰的无菌抽滤海水中，放入恒温光照培养箱内，在温度15℃，湿度60%，光照强度40μmol m?2 s?1条件下（L:D=12:12）培养促进种子的萌发。种子萌发后，转接到正常盐度的灭菌海水中，在温度15℃，湿度60%，光照强度40μmol m?2 s?1条件下（L:D=12:12）培养直至成苗。此方法可快速简便地培养大叶藻无菌苗。 4、在大叶藻原生质体制备时，用2%纤维素酶和0.5%果胶酶的组合，用0.5mol/L山梨醇做渗透压调节剂，酶解液pH为4.0，酶解48小时是最佳酶解条件。原生质体产量为1.95-3.96×106个/ml，存活率为80-90%。 本论文深入研究了大叶藻胚和叶片的组织细胞结构，探索得到的制备无菌苗和原生质体的方法为后续原生质体培养，原生质体融合，植株再生，遗传转化，新品种培育等工作打下基础，也能为建立大叶藻细胞工程繁殖技术，快速繁育优良大叶藻品系提供前期材料和技术储备。
大叶藻;胚石蜡切片;组织培养;原生质体
中国海洋大学
硕士
渔业
李琪
2013
中文
S968.4
45
2013-09-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）