两株海洋来源真菌次级代谢产物的研究
海洋天然产物具有骨架结构新颖，活性比例高的特点，海洋复杂的生态系统造就了海洋微生物的多样性，以及代谢的特异性，海洋微生物次级代谢产物近年来成为天然产物研究的热点。本论文对海洋来源的样品进行了菌株的分离纯化以及抗肿瘤活性筛选，并采用了活性及化学追踪的分离方法对其中2株真菌中的活性成分进行了深入研究。主要研究内容如下：海绵和珊瑚来源微生物的分离与抗肿瘤活性筛选；菌株发酵及次级代谢产物的提取分离；单体化合物的结构鉴定和活性评价。 从采集自西沙群岛和广西涠洲岛海域的10个珊瑚和海绵样品中共分离得到海绵珊瑚来源真菌30株。以P388肿瘤细胞系为活性筛选模型对30株真菌进行细胞毒活性筛选，筛选结果显示有6株真菌具有较好的细胞毒活性。结合HPLC和TLC信息挑选其中一株真菌作为目标菌株Alternaria sp. TZP-11进行发酵条件的摸索，并进行了活性成分的深入探索。此外挑选实验室前期一株能生产新颖化合物的菌株Penicillium sp. F23-2，采用OSMAC策略改变了其培养条件，对其发酵产物进行了重新研究。 对以上两株真菌的发酵浸膏运用多种色谱方法（TLC、MPLC、Sephadex LH-20、HPLC）进行了分离，采用小鼠白血病肿瘤细胞株P388细胞为筛选模型结合TLC及HPLC，进行活性及化学追踪分离。从Alternaria sp. TZP-11的乙酸乙酯提取物中分离得到13个单体化合物，从Penicillium sp.F23-2的中分离得到10个单体化合物，共23个化合物。 应用 UV、MS、NMR、IR等波谱方法阐明了其中21个化合物的化学结构，其中新化合物3个（1、19、20）（化合物结构参见Fig.1）。从真菌Alternaria sp. TZP-11中发现13个化合物，包括6个混源萜类化合物（1-6），2个联苯类化合物（7、8），1个Trichothecenes萜类化合物（9），1个类甾体化合物（10），3个苯衍生物（11-13）。从深海海泥真菌F23-2中解析出8个化合物，包括4个生物碱类化合物（14-17），1个萜类化合物（18），2个Ambuic Acid衍生物（19、20），1个甾类化合物（21）。对新化合物（1、19、20）及已知化合物（7-11）进行了抗肿瘤活性的初步评价，结果显示已知化合物（7、9、10）对小鼠白血病P388细胞具有一定的细胞增殖抑制活性，化合物（9、10）还对A-549细胞具有较好的增殖抑制活性。采用RLU法对上述9个化合物进行了抗炎活性测试，其中（7、8、9）对 RAW264.7细胞具有良好的抑制活性，IC50分别为22.1μM，27.6μM和74.5 nM。 综上所述，本文从采集至西沙群岛和广西涠洲岛的珊瑚和海绵样品中共分离到真菌30株，筛选出具有抗肿瘤活性菌株6株；从Alternaria sp. TZP-11以及Penicillium sp. F23-2的发酵产物中共分离得到23个单体化合物，解析了其中21个单体化合物的结构，新化合物3个。化合物7有中等强度的抗肿瘤活性，化合物（9、10）具有较强的抗肿瘤活性;化合物（7、8、9）具有较强的抗炎活性。以上研究内容丰富了实验室活性菌株资源，为抗癌和抗炎药物的筛选提供了活性化合物。
海洋真菌;次级代谢产物;分离提取;结构鉴定;抗肿瘤活性
中国海洋大学
硕士
药物化学
李德海
2013
中文
R282.77;R284.1
92
2013-09-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）