海洋嗜杀酵母Wickerhamomyces anomalus YF07b菌株新型嗜杀因子的研究
嗜杀因子(Killer toxin)是一些酵母菌分泌的具有抗微生物活力的外毒素，它们一般是分子量较小的蛋白质或者糖蛋白，通常首先作用于敏感酵母的细胞壁，可以不通过细胞接触而杀死一些同种或亲缘关系较近的酵母菌。能够产生嗜杀因子的酵母菌称为嗜杀酵母(Killeryeasts)，它们对自己所产生的嗜杀因子具有免疫性；能够被嗜杀酵母杀死的菌株称为敏感菌株；既不能被其他嗜杀酵母菌株杀死也不能杀死其他菌株的酵母称之为中性酵母。 海洋酵母Wickerhamomyces anomalus YF07b菌株是一株从海鞘（Sea squirts）肠道中分离的嗜杀菌株，具有较广的杀菌谱，其分泌的嗜杀因子可以杀死梭子蟹―乳化病‖的病原菌梅奇酵母（Metschnikowia bicuspidata)WCY菌株。 通过对海洋嗜杀酵母W. anomalus YF07b菌株产嗜杀因子的培养条件和嗜杀因子最适作用条件的优化，确定了产嗜杀因子的最佳培养条件：pH为3.5，NaCl的浓度为2.0％(w/v)，在20℃条件下180rpm振荡培养3d；嗜杀因子作用的最佳条件：pH3.5，NaCl的浓度为4.0%(w/v)，作用温度为16℃。曾有研究发现海洋嗜杀酵母W. anomalus YF07b菌株可以产生一种分子量为47.0kDa的嗜杀因子，该嗜杀因子既有嗜杀活性又有β-1,3-葡聚糖酶活性。但是在本研究中通过发酵上清液的制备、发酵上清液透析、DEAE-Sephorose Fast Flow阴离子交换、超滤浓缩、Sephadex G-75凝胶过滤层析、超速离心浓缩和SDS-PAGE电泳等步骤分离纯化出一种分子量约为67.0kDa的嗜杀因子，并且该纯化的嗜杀因子只具有嗜杀活性没有β-1,3-葡聚糖酶活性，所以本研究中纯化出的嗜杀因子是一种新型的嗜杀因子。纯化的新型嗜杀因子对Yarrowia lipolytica, Saccharomyces cerevisiae, M. bicuspidata WCY, Candida tropicalis, Candida albicans和Kluyveromyces aestuartii具有嗜杀作用，在 pH3.5和 NaCl浓度为4.0%(w/v)的嗜杀活性检测平板上在16℃培养条件下对敏感菌株WCY的嗜杀活性最强。 对纯化的新型嗜杀因子的嗜杀机理进行初步探究：纯化的嗜杀因子不能杀死WCY菌株的原生质体，却可以杀死完整的WCY菌株细胞，说明该嗜杀因子发挥嗜杀作用需要完整的细胞壁；吸附试验表明该嗜杀因子的初始结合位点存在于敏感酵母的细胞壁上；扫描电镜结果显示纯化的嗜杀因子可以破坏敏感酵母WCY细胞壁的完整性；荧光检测结果显示纯化的嗜杀因子能破坏敏感酵母WCY菌株细胞膜的通透性。推测纯化的新型嗜杀因子作用方式为：嗜杀因子与细胞壁上受体结合后转位至细胞膜，然后与细胞膜上的受体相互作用，破坏细胞膜的完整性，最终使细胞裂解死亡。
海洋嗜杀酵母;嗜杀因子;抗微生物活力;细胞接触
中国海洋大学
硕士
微生物学
池振明
2013
中文
Q935
76
2013-09-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）