斑马鱼(Danio rerio)甘露糖结合凝集素母源性免疫功能

卜令真

中国海洋大学

摘要：

补体系统（complement system）是先天性免疫系统的非常重要的组成部分，补体系统的激活有三条主要的途径：经典途径（classical pathway）、替代途径（alternative pathway）和凝集素途径（lectin pathway）。其中，凝集素途径被认为有可能是补体激活途径中比较古老的一条途径，因为已经发现无脊椎动物中存在甘露糖结合凝集素（mannose-binding lectin, MBL）和甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶（MBL-associated serine proteases, MASPs）。MBL是一种模式识别分子，可以与甘露糖结合以及调理带甘露糖的病原体，激活补体系统。　　本文采用mannan-agarose亲和层析的方法从斑马鱼4~8细胞的胚胎中纯化出了甘露糖结合凝集素，并对其功能进行了初步探索。细菌结合实验表明，从胚胎中纯化的MBL能与革兰氏阴性菌大肠杆菌（Escherichia coli）和革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）结合。促吞噬实验发现，纯化出的斑马鱼 MBL能促进鲤鱼巨噬细胞对大肠杆菌（E.coli）和金黄色葡萄球菌（S.aureus）的吞噬作用。胚胎匀浆能够促进鲤鱼巨噬细胞对大肠杆菌（E.coli）和金黄色葡萄球菌（S.aureus）的吞噬作用，而向胚胎匀浆中加入MBL抗体后，胚胎匀浆的促吞噬作用减弱。显微注射实验表明：向胚胎中注射MBL抗体后，胚胎在受到斑马鱼的主要致病菌嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）感染时死亡率显著升高；向胚胎中注射纯化的MBL后，胚胎对嗜水气单胞菌的抵抗能力增强；同时注射MBL和MBL抗体时，这种作用被显著地抑制。这说明MBL对发育中的胚胎具有保护作用。最后，本文采用免疫印迹（Western-blot）的方法证明斑马鱼胚胎中存在MASP。这些结果说明，斑马鱼中MBL参与早期胚胎免疫保护作用，它可能通过凝集素途径发挥作用。

关键词：斑马鱼;甘露糖;凝集素;母源性免疫功能

授予单位：中国海洋大学

授予学位：硕士

学科专业：发育生物学

导师姓名：张士璀

学位年度：2013

语种：中文

分类号：S965.8

页数：79

在线出版日期：2013-09-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）