仿刺参(Apostichopus japonicus)皂苷HPLC-ELSD分析方法的建立及其定性鉴别
本文以北方常见的食用仿刺参为研究对象，初步优化了仿刺参皂苷的提取方法，并选取HPLC-ELSD法对其皂苷提取液进行检测，通过对各检测条件的优化，最终确立了仿刺参皂苷的HPLC-ELSD检测条件。利用该HPLC色谱条件，采用HPLC-MS/MS技术对仿刺参中皂苷进行定性鉴定。本文建立了一种能考察仿刺参中皂苷质量的简单易行，稳定可靠的科学方法，为辨别仿刺参的优劣和建立仿刺参的质量评价标准，提供了可靠的理论基础和科学依据，对仿刺参养殖和加工产业的发展具有重要的经济价值。本文设计正交实验，对提取溶剂、料液比、提取时间、提取次数四个因子进行了考察，得仿刺参皂苷的最佳提取方法为：60％乙醇为提取溶剂，物料比为1∶800，提取次数为5次，每次3h。通过对色谱柱、流动相、流速、柱温及蒸发光检测器参数的优化，最终确定了HPLC-ELSD的色谱条件为：Waters Symmetry C18色谱柱（150×4.6mm，5μm），采用5mM醋酸铵水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱，流速0.7 mL/min，柱温40℃，进样量20μL，分析时间为60min，蒸发光散射检测器参数：漂移管温度为60℃，雾化效率为50%。载气压力为25psi，TMP为100，方法学验证表明该法精密度符合要求，重复性良好，样品在24h内稳定。
本研究根据已建立的HPLC色谱分析条件，采用HPLC-ESI-IT-MS/MS技术，对仿刺参皂苷的柱后流出液进行定性研究，发现在负离子模式下响应信号好。通过ESI-IT-MS产生的[M-H]-/[M+NH4]+获得化合物的分子质量信息；通过源内CID技术对[M-H]-进一步电离获得了一系列海参皂苷类特征碎片离子信息，与文献对比，对MS图上的仿刺参皂苷定性鉴别，在MS色谱图上，保留时间在14.0～30.5min之间的色谱峰中有16个色谱峰鉴定为海参皂苷类化合物；仿刺参皂苷HPLC图和MS图上，在14.0～30.5min之间的峰数和峰响应值基本一致，进而定性鉴别HPLC色谱图上的皂苷峰。根据此法可在缺少海参皂苷标准品的情况下，采用常用的HPLC法对仿刺参皂苷进行定性及定量检测，节约了资源，具有很好的经济价值。该HPLC法的建立为进一步研究开发海参皂苷的检测分析方法奠定了基础，为更加全面地对海参产品进行考察提供了科学依据，对填补了海参产品质量标准空白的问题具有重要的意义。
仿刺参药材;药材鉴定;海参皂苷;色谱分析
中国海洋大学
硕士
药物化学
吕志华
2012
中文
R282.740.3;R284.1
72
2012-12-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）