土霉素胁迫下半滑舌鳎肠道耐药菌与药物残留的量效研究
为了研究半滑舌鳎肠道耐药性和体内药物残留的量效关系，本文模拟水产养殖实际，在海水温度为(22±1)℃下，以半滑舌鳎为养殖对象，以125mg/(kg·d)剂量拌料投喂土霉素(Oxytetracycline，OTC)11天，在投药期和投药后32天内，利用选择培养基检测其肠道细菌和弧菌耐药率，并绘制其随时间的变化规律，研究肠道细菌在土霉素的胁迫条件下耐药性反应；同时用HPLC检测其肌肉，血清和肝脏三种组织中土霉素残留量，为安全合理用药，预测休药期提供帮助；最后将耐药率的变化规律和不同组织的药时曲线拟合，寻找耐药率和残留量的相互关系。为水产动物饲养过程中，药物残留检测探索一种提供新的研究思路。
(1)肠道细菌计数培养基和选择培养基中土霉素剂量的确定通过对不同培养基检测肠菌数量，并对菌数稳定性和平行性分析，最终选择海水营养琼脂(MNA)和海水TCBS(MTCBS)两种培养基作为海水和肠道细菌和弧菌计数的理想培养基，在后续实验中使用。
在MNA和MTCBS两种培养基中，分别添加三种质量浓度16μg/ml、80μg/ml和160μg/ml的OTC，制成三种不同耐药等级的选择培养基，检测鱼肠道中细菌和弧菌的耐药率。发现三种等级耐药率分散性良好，并与质量浓度线性关系好。因此在后续实验中选择16、80和160μg/ml三种质量浓度的OTC作为耐药率选择培养基的添加剂量。
(2)OTC对半滑舌鳎肠道细菌和弧菌耐药性的影响将三种OTC质量浓度16、80和160μg/ml，分别添加到MNA和MTCBS中，作为细菌和弧菌的低、中和高不同耐药性等级(强度)的选择培养基，对半滑舌鳎养殖中肠道细菌和弧菌耐药强度检测，发现肠道菌群耐药率发生了较大的变化。综合分析可以得出如下结论：
①在实验期间，半滑舌鳎肠道细菌和弧菌耐药率变化曲线基本呈现先增加后减少的变化趋势：在投药期间迅速上升，并在投药期最后一天达到最大值，停药后失去了外界药物选择压力，耐药率逐步接近或者降低至对照组水平。
②同一耐药率等级的两种培养基中，弧菌的耐药率比细菌的耐药率大。肠道细菌和弧菌耐药率都随着培养基中添加OTC质量浓度的升高而降低。因此，在投药期的最后一天，6种耐药率随时间变化曲线中，耐药率同时达到最大值。其中肠道弧菌的低耐药性耐药率达到最高值(75.23±3.39)％，而肠道细菌低耐药性耐药率为最低值(18.64±2.70)％。
③在休药期后期，除了低耐药性弧菌耐药率降低到对照组水平外，其余的耐药率仍然普遍高于对照组。
(3)半滑舌鳎组织中OTC的残留检测分析在投药期间，OTC在实验鱼肌肉、血清和肝脏中的残留量在投药期间呈现累积和消除的平衡状态，分别在第7天、第4天和第7天达到最大残留量(3.14±0.27)μg/g、(3.05±0.29)μg/ml和(7.20±1.17)μg/g。在休药期，三者都迅速下降，直到低于本实验的检测限0.05μg/g。OTC在肌肉，血清和肝脏三者中消除所需时间分别为10d、8d和12d。
(4)半滑舌鳎肠道细菌和弧菌耐药率与鱼体OTC残留的拟合关系在OTC在鱼体内的消除时间内，通过对肠道细菌和弧菌的耐药率和半滑舌鳎三种组织(肌肉、血清和肝脏)中OTC残留量综合分析可知，二者存在较好的相关性，从而获得18条拟合曲线。通过测定半滑舌鳎肠道细菌的耐药率来获取鱼体中各组织中OTC的残留量，进而缩短了检测时间，提高水产养殖动物的质量品质控制水平。
本研究通过筛选实验，使用海水营养琼脂和海水TCBS作为养殖水体和水产动物肠道细菌和弧菌耐药率的选择培养基，对在半滑舌鳎正常投喂OTC的过程和投喂后进行耐药率检测。并与药物残留量拟合。为利用鱼肠道细菌(或弧菌)的耐药率来表征鱼体内OTC的残留量，探索药物残留的检测方法提供了一种新的研究思路，而且为建立一种利用生态指示菌模型对半滑舌鳎养殖过程用药进行数量和强度的安全控制模式提供研究方法和理论依据。
土霉素;半滑舌鳎;耐药菌;药物残留
中国海洋大学
硕士
食品科学
江晓路
2009
中文
S963.14
77
2009-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）