饲料脂肪酸对鲈鱼幼鱼生长、健康及脂肪和脂肪酸累积的影响
本研究以我国重要海水经济养殖鱼类鲈鱼(Lateolabrax japonicus)为实验对象，在海水浮式网箱(1.5×1.5×2.0 m)中进行摄食生长实验，研究饲料脂肪酸对鲈鱼幼鱼生长性能及健康状态的影响，并在此基础上探讨其体内相关脂肪酸代谢机理。本文主要研究内容和结果如下： 1、饲料中二十二碳六烯酸(DHA)/二十碳五烯酸(EPA)比例对鲈鱼幼鱼生长性能、非特异免疫力、抗应激能力及脂肪酸组成的影响 以初始体重9.48g的鲈鱼(Lateolabrax japonicus)幼鱼为实验对象，通过70d的摄食生长实验，研究饲料二十二碳六烯酸(22:6n-3, docosahexaenoic acid, DHA)/二十碳五烯酸(20:5n-3, eicosapentaenoic acid, EPA)比例对鲈鱼幼鱼生长性能、免疫力及机体脂肪酸组成的影响。以鱼粉、豆粕等为主要蛋白源，以小麦粉为主要糖源制作基础饲料，在基础饲料中添加DHA纯化油及EPA纯化油，且保持饲料中长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)含量相同，分别制作不同DHA/EPA比例(0.55、1.04、1.53、2.08、2.44和2.93)的等氮等能饲料。每个处理3个重复，每个重复放30尾鱼。每天饱食投喂2次。实验期间，温度22.5-31.5℃，盐度28‰-33‰，溶解氧6 mg l?1。实验结果表明，随着饲料中DHA/EPA比例从0.55升高到2.08，特定生长率(SGR)显著升高(P<0.05)，此后，SGR显著降低(P<0.01)。SGR在DHA/EPA2.08饲料组达到最大。饲料效率(FER)同SGR有着相似的趋势，并且也在DHA/EPA2.08饲料组达到最大。但是，成活率、肝体比、脏体比及肥满度在各处理组间没有差异(P>0.05)。免疫分析表明，低(0.55)DHA/EPA处理组的血清溶菌酶(LYZ)活性和血清超氧化物岐化酶(SOD)活性显著低于较高比例处理组(1.53~2.93)。1.53 DHA/EPA处理组的血清替代途径补体(ACP)活性显著高于2.93 DHA/EPA处理组(P<0.05)。但是，头肾巨噬细胞呼吸爆发活性和血清过氧化氢酶(CAT)活性在各处理组间没有显著差异。干露应激后的成活率在中等DHA/EPA(1.53,2.08及2.93)比例处理组显著高于低比例(0.55)处理组(P<0.01)。全鱼、肝脏和肌肉的脂肪酸组成很好地反映了饲料脂肪酸组成。鱼体组织，特别是肌肉中，DHA的含量要大大高于EPA。综上所述，饲料中适量的DHA/EPA比例(1.53-2.44)能显著提高鲈鱼幼鱼的生长、免疫功能和抗应激能力。以特定生长率为评价指标，采用二次曲线分析，得出鲈鱼幼鱼配合饲料中最适DHA/EPA比例为2.05. 2、饲料中花生四烯酸(arachidonic acid, ARA)对鲈鱼幼鱼生长性能、非特异免疫力、抗应激能力及脂肪酸组成的影响 以初始体重9.48g的鲈鱼(Lateolabrax japonicus)幼鱼为实验对象，通过84 d的摄食生长实验，研究饲料花生四烯酸含量对鲈鱼幼鱼生长性能、非特异性免疫力及机体脂肪酸组成的影响。以鱼粉、豆粕等为主要蛋白源，以小麦粉为主要糖源制作基础饲料，在基础饲料中添加 ARA纯化油来分别制作含不同 ARA量(0.08％(对照组)、0.22%、0.36%、0.56%、1.33%和2.12%)的等氮等能的饲料并使所有饲料中所含二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA)含量相同。每个处理3个重复，每个重复放30尾鱼。每天饱食投喂2次。实验期间，温度22.5-31.5℃，盐度28‰-33‰，溶解氧6 mg l?1。实验结果表明，随着饲料中ARA含量从0.08%升高到0.36%，实验鱼的末重(FW)和特定生长率(SGR)显著升高(P<0.05)，之后呈下降趋势。饲料效率在各处理间具有与SGR相同的变化趋势，0.36%ARA处理组的饲料效率显著高于对照组(P<0.05)。存活率在各处理间没有显著性差异(P>0.05)。随着饲料 ARA含量的升高，实验鱼肝体比显著降低(P<0.05)，当饲料中ARA含量高于0.22%时，实验鱼的肝体比极显著低于对照组(P<0.01)。在一定范围内(0.36-0.56%)，饲料中ARA含量的增加显著增强了实验鱼血清溶菌酶(LYZ)、血清替代补体活力(ACP)及血清超氧化物歧化酶(SOD)的活力。但是，头肾巨噬细胞呼吸爆发活力和血清过氧化氢酶活力在各处理组间没有显著性差异。体成分分析结果显示，随着饲料ARA含量的升高，鱼体蛋白含量先升高后下降，而鱼体脂肪含量则呈现相反的趋势。实验鱼体和肝脏脂肪酸组成很好地反映了饲料脂肪酸组成情况，但是，实验鱼肝脏EPA含量与饲料ARA含量呈负相关趋势。本实验结果表明，饲料ARA水平，尤其是在合适的范围内(0.22-0.56%)，显著提高了实验鱼的生长性能和非特异性免疫力，改变了鱼体组织的常规成分和脂肪酸组成。 3、饲料中亚麻酸(linolenic acid, LNA)和亚油酸(linoleic acid, LA)对鲈鱼幼鱼生长性能、非特异免疫力及脂肪酸组成的影响 以初始体重10.09g的鲈鱼(Lateolabrax japonicus)幼鱼为实验对象，通过66d的摄食生长实验，研究饲料亚麻酸和亚油酸含量对鲈鱼幼鱼生长性能、非特异性免疫力及机体脂肪酸组成的影响。以鱼粉、豆粕等为主要蛋白源，以小麦粉为主要糖源制作基础饲料，在基础饲料中通过使用亚麻油和豆油以不同的比例替代鱼油来实现饲料不同的亚麻酸和亚油酸水平(Diet FO，全鱼油组；Diet F2L1，2/3鱼油+1/3亚麻油；Diet F1L2，1/3鱼油+2/3亚麻油；Diet LO，全亚麻油组；Diet F2S1，2/3鱼油+1/3豆油；Diet F1S2，1/3鱼油+2/3豆油；Diet SO，全豆油组；Diet F1L1S1，1/3鱼油+1/3亚麻油+1/3豆油)。每个处理3个重复，每个重复放30尾鱼。每天饱食投喂2次。实验期间，温度23.5-30.0℃，盐度28‰-32‰，溶解氧6-7 mg l?1。实验结果表明，F2L1饲料组的实验鱼其终末体重和特定生长率显著高于SO饲料组(P<0.05)。F2L1饲料组的饲料效率显著高于F2S1及 SO组，而SO饲料组的饲料效率显著低于FO、F2L1及F1L2组(P<0.05)。成活率在各处理组间没有显著性差异。LO饲料组的实验鱼其肝体比显著高于F1L1S1组(P<0.05)。体成分分析显示，LO饲料组的实验鱼其体水分含量显著低于FO、F1L1及F1L2组(P<0.05)，而相反地，LO饲料组的体脂肪含量则显著高于FO、F1L1及F1L2组(P<0.05)。对实验鱼非特异性免疫力的分析表明，FO组的实验鱼其头肾巨噬细胞的吞噬指数显著LO和SO组(P<0.05)。F2L1饲料组的血清超氧化物歧化酶(SOD)活性显著高于F1L2、LO、F2S1、F1S2及SO组，而SO饲料组的血清SOD活性显著低于FO和F2L1组(P<0.05)。F2L1饲料组的血清过氧化氢酶(CAT)活性显著高于SO组(P<0.05)。全鱼、肝脏及肌肉的脂肪酸组成密切反映了饲料脂肪酸组成。综上所述，饲料中亚麻酸和亚油酸的含量显著影响了鲈鱼幼鱼的生长性能、非特异性免疫力及机体脂肪酸组成。当鱼油和亚麻油以2比1混合使用时，提高了鲈鱼幼鱼的生长性能及非特异性免疫力而当以豆油为主要脂肪源时，鲈鱼幼鱼的生长性能及非特异性免疫力有所降低。 4、鲈鱼Δ6脂肪酸去饱和酶(FAD6)的基因克隆、特征分析及其肝脏mRNA表达受饲料中脂肪酸的调控 以鲈鱼为实验材料，运用同源基因克隆法和RACE技术克隆得到了编码鲈鱼Δ6去饱和酶(FAD6)的基因序列。该cDNA全长1920bp，开放阅读框1338bp，编码445个氨基酸。预测蛋白分子量51.8kDa，等电点8.86。通过对氨基酸序列特征分析发现该蛋白含3个跨膜区，6个磷酸化位点(4个丝氨酸位点，2个苏氨酸位点)。通过氨基酸序列比对发现，花鲈 FAD6与其它已知脊椎动物具有高度同源性。该序列具有属于Δ6去饱和酶家族的保守区域。实时荧光定量PCR结果显示，FAD6在花鲈脑、眼、肝脏和肠道中的mRNA表达量显著高于其他组织。通过投喂花鲈含不同链长和去饱和度脂肪酸(分别为：C8:0+C10:0、C16:0、C18:0、C18:1n-9、C18:3n-3和n-3 LC-PUFA)的饲料10周后，再运用实时荧光定量PCR分析 FAD6在实验鱼肝脏中的mRNA表达量，结果表明，C8:0+C10:0及 n-3 LC-PUFA的处理组鲈鱼肝脏中FAD6 mRNA的表达量显著低于其他组(P<0.05)。而C16:0处理组肝脏中FAD6 mRNA的表达量显著高于其他组(P<0.05)。C18:0，C18:1n-9及C18:3n-3处理组间FAD6 mRNA的表达量没有显著性差异(P>0.05)。该结果表明，饲料中中链脂肪酸及高不饱和脂肪酸的添加能够抑制花鲈肝脏中Δ6去饱和酶的表达，而饲料中C16:0的添加能够提高花鲈肝脏中Δ6去饱和酶的基因表达。 5、饲料中不同链长和去饱和度脂肪酸对鲈鱼幼鱼生长性能、体成分、脂肪和脂肪酸沉积、肝脏健康及肌肉品质的影响 本实验以初始体重29.53g的鲈鱼(Lateolabrax japonicus)幼鱼为实验对象，通过70d的摄食生长实验，研究饲料中不同链长和去饱和度的脂肪酸对鲈鱼幼鱼生长性能、机体脂肪和脂肪酸沉积、肝脏健康及肌肉品质的影响。以鱼粉、豆粕等为主要蛋白源，以小麦粉为主要糖源制作基础饲料，在基础饲料中通过添加不同的脂肪源来分别使各实验处理饲料具有不同的代表性脂肪酸：①中链脂肪酸组(Midium-chain fatty acid, MCA)：辛酸癸酸三甘油酯(C8:0和C10:0各占总脂肪酸的50%)；②饱和脂肪酸软脂酸组(Palmitic acid, PA)：三软脂酸甘油酯(C16:0)；③饱和脂肪酸硬脂酸组(Stearic acid, SA)：三硬脂酸甘油酯(C18:0)；④单不饱和脂肪酸油酸组(Oleic acid, OA)：菜籽油(代表性脂肪酸C18:1n-9)；⑤n-3系列18碳多不饱和脂肪酸亚麻酸(α-linolenic acid, LNA)：亚麻油和苏子油以3:1混合(代表性脂肪酸 C18:3n-3)；⑥n-3系列长链多不饱和脂肪酸(n-3 LC-PUFA)：n-3 LC-PUFA纯化油(DHA+EPA含量约占总脂肪酸的60%)；⑦鱼油对照组(Fish oil, FO)。每个处理3个重复，每个重复放30尾鱼。每天饱食投喂2次。实验期间，温度23.5-28.5℃，盐度29‰-32‰，溶解氧6-7 mg l?1。实验结果表明，MCA饲料组的实验鱼终末体重显著低于其他处理组，PA和 SA饲料组的实验鱼其终末体重显著低于OA、LNA、n-3 LC-PUFA和FO处理组(P<0.05)，鱼油组的实验鱼其终末体重显著高于除LNA和n-3 LC-PUFA组的其他处理组(P<0.05)，OA和LNA处理组及LNA和n-3 LC-PUFA处理组之间终末体重没有显著性差异。特定生长率(SGR)的变化趋势与终末体重相似。鱼油组的饲料效率显著高于MCA和PA组(P<0.05)，而MCA组的饲料效率显著低于LNA、n-3 LC-PUFA及FO组。MCA饲料组的实验鱼其摄食率显著低于其他处理组(P<0.05)。
饲料脂肪酸;鲈鱼;幼鱼生长;脂肪酸累积
中国海洋大学
博士
水产养殖
麦康森
2013
中文
S965.211;S963.161
229
2013-09-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）